易基因送样要求（版本：2025年01月）

A.DNA类文库送样要求
1. 常规全基因组重亚硫酸盐甲基化测序（WGBS）

提取的DNA样品：
(1) 提取完整的基因组DNA，无显著降解，无明显的RNA污染；
(2) Qubit检测DNA的总量不低于1 μg，浓度正常不低于10ng/μl，推荐溶解在TE缓冲液中；
(3) 已提取DNA可通过干冰或冰袋寄送。

组织样品：
(1) 优先选择新鲜采集的样本，其次才是长期冻存组织，组织长期冻存优先推荐液氮冻存；对于植物组织尽量选取嫩幼的器官；
(2) 对于新鲜组织离体分离后，快速切成小块，去除结缔组织等，PBS漂洗去除残留血液后，液氮保存；
(3) 动物组织推荐送样量不小于30mg；植物组织推荐送样量不低于100mg；
(4) 组织样品推荐通过干冰寄送。

培养细胞样品：
(1) 细胞生长至对数期，贴壁细胞胰酶消化，500g离心5min，去培养基后PBS悬浮，500g离心5min，收集约10的6次方细胞沉淀，干冰寄送。

2. 精准DNA甲基化和/或羟甲基化测序（oxWGBS）

提取的DNA样品：
(1) 提取完整的基因组DNA，无显著降解，无明显的RNA污染；
(2) Qubit检测DNA的总量不低于3 μg，浓度正常不低于30ng/μl，推荐溶解在TE缓冲液中；
(3) 已提取DNA可通过干冰或冰袋寄送。

组织样品：
(1) 优先选择新鲜采集的样本，其次才是长期冻存组织，组织长期冻存优先推荐液氮冻存；对于植物组织尽量选取嫩幼的器官；
(2) 对于新鲜组织离体分离后，快速切成小块，去除结缔组织等，PBS漂洗去除残留血液后，液氮保存；
(3) 动物组织推荐送样量不小于60mg；植物组织推荐送样量不低于150mg；
(4) 组织样品推荐通过干冰寄送。

培养细胞样品：
(1) 细胞生长至对数期，贴壁细胞胰酶消化，500g离心5min，去培养基后PBS悬浮，500g离心5min，收集约10的6次方细胞沉淀，干冰寄送。

3. 简化重亚硫酸盐测序（RRBS/dRRBS）

提取的DNA样品：
(1) 提取完整的基因组DNA，无明显降解和RNA污染；
(2) Qubit检测DNA的总量不低于1 μg，浓度正常不低于20ng/μl;
(3) DNA溶解于EB缓冲液中（10mM Tris-HCl，pH 7.5-8.5）,不推荐溶解在TE缓冲液中；
(4) 已提取DNA可通过干冰或冰袋寄送。

组织样品：
(1) 优先选择新鲜采集的样本，其次才是长期冻存组织，组织长期冻存优先推荐液氮冻存；对于植物组织尽量选取嫩幼的器官；
(2) 对于新鲜组织离体分离后，快速切成小块，去除结缔组织等，PBS漂洗去除残留血液后，液氮保存；
(3) 动物组织推荐送样量不小于60mg；植物组织推荐送样量不低于150mg；
(4) 组织样品推荐通过干冰寄送。

培养细胞样品：
(1) 细胞生长至对数期，贴壁细胞胰酶消化，500g离心5min，去培养基后PBS悬浮，500g离心5min，收集约10的6次方细胞沉淀，干冰寄送。

4. 简化氧化和重亚硫酸盐测序（oxRRBS & RRBS）

提取的DNA样品：
(1) 提取完整的基因组DNA，无明显降解和RNA污染；
(2) Qubit检测DNA的总量不低于3 μg，浓度正常不低于20ng/μl;
(3) DNA溶解于EB缓冲液中（10mM Tris-HCl，pH 7.5-8.5）,不推荐溶解在TE缓冲液中；
(4) 已提取DNA可通过干冰或冰袋寄送。

组织样品：
(1) 优先选择新鲜采集的样本，其次才是长期冻存组织，组织长期冻存优先推荐液氮冻存；对于植物组织尽量选取嫩幼的器官；
(2) 对于新鲜组织离体分离后，快速切成小块，去除结缔组织等，PBS漂洗去除残留血液后，液氮保存；
(3) 动物组织推荐送样量不小于60mg；植物组织推荐送样量不低于150mg；
(4) 组织样品推荐通过干冰寄送。

培养细胞样品：
(1) 细胞生长至对数期，贴壁细胞胰酶消化，500g离心5min，去培养基后PBS悬浮，500g离心5min，收集约10的6次方细胞沉淀，干冰寄送。

5. 液相杂交捕获重亚硫酸盐甲基化测序（LHC-BS）

提取的DNA样品：
(1) 提取完整的基因组DNA，无明显降解和RNA污染；
(2) Qubit检测DNA的总量不低于3μg，浓度正常不低于20ng/μl，DNA推荐溶解于TE缓冲液中；
(3) 已提取DNA可通过干冰或冰袋寄送。

组织样品：
(1) 优先选择新鲜采集的样本，其次才是长期冻存组织，组织长期冻存优先推荐液氮冻存；对于植物组织尽量选取嫩幼的器官；
(2) 对于新鲜组织离体分离后，快速切成小块，去除结缔组织等，PBS漂洗去除残留血液后，液氮保存；
(3) 动物组织推荐送样量不小于60mg；植物组织推荐送样量不低于150mg；
(4) 组织样品推荐通过干冰寄送。

培养细胞样品：
(1) 细胞生长至对数期，贴壁细胞胰酶消化，500g离心5min，去培养基后PBS悬浮，500g离心5min，收集约10的6次方细胞沉淀，干冰寄送；

6. 甲基化DNA免疫共沉淀测序(MeDIP)

提取的DNA样品：
(1) 提取完整的基因组DNA，无明显降解和RNA污染；
(2) Qubit检测DNA的总量不低于2 μg，浓度正常不低于20ng/μl，DNA推荐溶解于TE缓冲液中；
(3) 已提取DNA可通过干冰或冰袋寄送。

组织样品：
(1) 优先选择新鲜采集的样本，其次才是长期冻存组织，组织长期冻存优先推荐液氮冻存；对于植物组织尽量选取嫩幼的器官；
(2) 对于新鲜组织离体分离后，快速切成小块，去除结缔组织等，PBS漂洗去除残留血液后，液氮保存；
(3) 动物组织推荐送样量不小于60mg；植物组织推荐送样量不低于150mg；
(4) 组织样品推荐通过干冰寄送。

培养细胞样品：
(1) 细胞生长至对数期，贴壁细胞胰酶消化，500g离心5min，去培养基后PBS悬浮，500g离心5min，收集约10的6次方细胞沉淀，干冰寄送。


7. 羟甲基化DNA免疫共沉淀测序(hMeDIP)

提取的DNA样品：
(1) 提取完整的基因组DNA，无明显降解和RNA污染；
(2) Qubit检测DNA的总量不低于3μg，浓度正常不低于20ng/μl，DNA推荐溶解于TE缓冲液中；
(3) 已提取DNA可通过干冰或冰袋寄送。

组织样品：
(1) 优先选择新鲜采集的样本，其次才是长期冻存组织，组织长期冻存优先推荐液氮冻存；对于植物组织尽量选取嫩幼的器官；
(2) 对于新鲜组织离体分离后，快速切成小块，去除结缔组织等，PBS漂洗去除残留血液后，液氮保存；
(3) 动物组织推荐送样量不小于60mg；植物组织推荐送样量不低于150mg；
(4) 组织样品推荐通过干冰寄送。

培养细胞样品：
(1) 细胞生长至对数期，贴壁细胞胰酶消化，500g离心5min，去培养基后PBS悬浮，500g离心5min，收集约10的6次方细胞沉淀，干冰寄送。


8. 扩增子甲基化（Amplicon-BS）

提取的DNA样品：
(1) 提取完整的基因组DNA，无明显降解和RNA污染；
(2) Qubit检测DNA的总量不低于100ng/amplicon，浓度正常不低于10ng/μl，DNA推荐溶解于TE缓冲液中；
(3) 已提取DNA可通过干冰或冰袋寄送。

组织样品：
(1) 优先选择新鲜采集的样本，其次才是长期冻存组织，组织长期冻存优先推荐液氮冻存；对于植物组织尽量选取嫩幼的器官；
(2) 对于新鲜组织离体分离后，快速切成小块，去除结缔组织等，PBS漂洗去除残留血液后，液氮保存；
(3) 动物组织推荐送样量不小于60mg；植物组织推荐送样量不低于150mg，实际用量根据PCR产物多少确定；
(4) 组织样品推荐通过干冰寄送。

培养细胞样品：
(1) 细胞生长至对数期，贴壁细胞胰酶消化，500g离心5min，去培养基后PBS悬浮，500g离心5min，收集约10的6次方细胞沉淀，干冰寄送。

9. 单细胞/微量细胞全基因组甲基化

(1) 分离细胞经PBS洗涤，去除培养过程或体液杂质，该杂质可直接抑制后续酶反应；
(2) 用流式细胞仪或显微操作分离单细胞与0.2ml的PCR管中底部；
(3) 细胞分离后的体积推荐1-5ul，最多不超过10ul，加等体积的公司寄送的DNA裂解液和1ul的蛋白酶K，37℃反应1小时，反应后-80℃保存；
(4) 记录每管细胞体积和加入的buffer体积和蛋白酶K体积；
(5) 记录每管细胞的数量，微量细胞推荐每个样品细胞量相同，在100-300个细胞之间；若细胞数量大于1000，细胞分离体积不超过20ul；
(6) 用 Parafilm 封口膜缠绕封口，装入 PCR管盒，橡皮筋固定，再装入自封袋，大体积干冰运输。

10. 特殊样本甲基化测序（FFPE/cfDNA等）

(1) FFPE/游离DNA等严重降解的全基因组甲基化检测推荐提供DNA总量不低于10ng，浓度正常不低于1ng/ul，DNA溶解于EB缓冲液（10mM Tris-HCl，pH 7.5-8.5） 。
 
B.RNA类文库送样要求
1. 普通转录组测序（RNA-seq）

提取的RNA样品：
(1) 提取的总RNA Qubit检测总量不低于2μg，浓度正常≥50ng/ul；
(2) 电泳检测具有明显的18S或28S主带，且条带清晰，或RIN值不低于7，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通过干冰寄送。

组织样品：
(1) 优先选择新鲜采集的样本，其次才是长期冻存组织，组织长期冻存优先推荐液氮冻存；对于植物组织尽量选取嫩幼的器官；
(2) 对于新鲜组织离体分离后，PBS漂洗去除残留血液，快速切成小块，去除结缔组织等，推荐用RNA later液氮保存；或组织处理后液氮研磨，在1.5ml离心管中加入1ml的Trizol剧烈混匀，-80℃保存；
(3) 动物组织推荐送样量不小于60mg；植物组织推荐送样量不低于150mg；
(4) 组织样品推荐通过干冰寄送。

培养细胞样品：
(1) 细胞生长至对数期，贴壁细胞胰酶消化，500g离心5min，去培养基后PBS悬浮，500g离心5min，收集10的6-7次方细胞沉淀，在细胞沉淀中加入1ml的Trizol裂解液，将细胞吹散，干冰寄送。

2. 真核链特异性转录组测序（ssRNA-seq）

提取的RNA样品：
(1) 提取的总RNA Qubit检测总量不低于2μg，浓度正常≥100ng/ul；
(2) 电泳检测具有明显的18S或28S主带，且条带清晰，或RIN值不低于7，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通过干冰寄送。

组织样品：
(1) 优先选择新鲜采集的样本，其次才是长期冻存组织，组织长期冻存优先推荐液氮冻存；对于植物组织尽量选取嫩幼的器官；
(2) 对于新鲜组织离体分离后，PBS漂洗去除残留血液，快速切成小块，去除结缔组织等，推荐用RNA later液氮保存；或组织处理后液氮研磨，在1.5ml离心管中加入1ml的Trizol剧烈混匀，-80℃保存；
(3) 动物组织推荐送样量不小于60mg；植物组织推荐送样量不低于150mg；
(4) 组织样品推荐通过干冰寄送。

培养细胞样品：
(1) 细胞生长至对数期，贴壁细胞胰酶消化，500g离心5min，去培养基后PBS悬浮，500g离心5min，收集10的6-7次方细胞沉淀，在细胞沉淀中加入1ml的Trizol裂解液，将细胞吹散，干冰寄送。

3. Small RNA测序

提取的RNA样品：
(1) 提取的总RNA Qubit检测总量不低于2μg，浓度正常≥100ng/ul；
(2) 电泳检测具有明显的18S或28S主带，且条带清晰，或RIN值不低于7，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通过干冰寄送。

组织样品：
(1) 优先选择新鲜采集的样本，其次才是长期冻存组织，组织长期冻存优先推荐液氮冻存；对于植物组织尽量选取嫩幼的器官；
(2) 对于新鲜组织离体分离后，PBS漂洗去除残留血液，快速切成小块，去除结缔组织等，推荐用RNA later液氮保存；或组织处理后液氮研磨，在1.5ml离心管中加入1ml的Trizol剧烈混匀，-80℃保存；
(3) 动物组织推荐送样量不小于60mg；植物组织推荐送样量不低于150mg；
(4) 组织样品推荐通过干冰寄送。

培养细胞样品：
(1) 细胞生长至对数期，贴壁细胞胰酶消化，500g离心5min，去培养基后PBS悬浮，500g离心5min，收集10的6-7次方细胞沉淀，在细胞沉淀中加入1ml的Trizol裂解液，将细胞吹散，干冰寄送。

4. ceRNA测序

提取的RNA样品：
(1) 提取的总RNA Qubit检测总量不低于2μg，浓度正常≥100ng/ul；
(2) 电泳检测具有明显的18S或28S主带，且条带清晰，或RIN值不低于7，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通过干冰寄送。

组织样品：
(1) 优先选择新鲜采集的样本，其次才是长期冻存组织，组织长期冻存优先推荐液氮冻存；对于植物组织尽量选取嫩幼的器官；
(2) 对于新鲜组织离体分离后，PBS漂洗去除残留血液，快速切成小块，去除结缔组织等，推荐用RNA later液氮保存；或组织处理后液氮研磨，在1.5ml离心管中加入1ml的Trizol剧烈混匀，-80℃保存；
(3) 动物组织推荐送样量不小于60mg；植物组织推荐送样量不低于150mg；
(4) 组织样品推荐通过干冰寄送。
培养细胞样品：
(1) 细胞生长至对数期，贴壁细胞胰酶消化，500g离心5min，去培养基后PBS悬浮，500g离心5min，收集10的6-7次方细胞沉淀，在细胞沉淀中加入1ml的Trizol裂解液，将细胞吹散，干冰寄送。

5. 常规m6A RNA甲基化测序（MeRIP）

提取的RNA样品：
(1) 提取的总RNA Qubit检测总量不低于75μg，浓度正常≥750ng/ul；
(2) 电泳检测具有明显的18S或28S主带，且条带清晰，或RIN值不低于7.5，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通过干冰寄送。

动物组织样品：
(1) 优先选用新鲜采集的样本，液氮或-80℃冻存的组织，冻存期间避免反复冻融；组织量推荐不小于50mg；
(2) 组织离体后，用PBS或生理盐水快速漂洗，去除残留血液，血管或结缔组织后，马上进行液氮萃冻，后转入冻存管液氮或-80℃保存；或将组织切成小片后，在含有RNA later的冻存管中液氮或-80℃保存；

植物组织样品：
(1) 植物组织样本建议送样量≥500mg。尽量选取新鲜、幼嫩、生长 旺盛的组织部位；
(2) 准确取得所需组织后，用清水清洗干净表面的灰尘及泥土，立即放入事先标记好的冻存管中，或者用锡箔纸包裹好做好标记；
(3) 立即投入液氮中萃冻，后进行液氮或-80℃冰箱保存；

培养细胞样品：
(1) 贴壁细胞，细胞生长至对数期或达到细胞表型，去除细胞培养基，PBS漂洗细胞2-3次，最后一次将PBS去除干净，（一定要去除干净，残留小于10ul），按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器轻轻吹打，用Trizol将细胞裂解下来，转入1.5ml离心管后，-80℃保存；每个样本细胞数量建议10的7次方左右；
(2) 悬浮细胞，细胞生长至对数期或达到细胞表型后，收集细胞，用PBS洗涤1-2次，最后一次离心后，去除干净PBS，按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器快速将细胞重悬，转入1.5ml离心管后，-80℃保存；每个样本细胞数量建议10的7次方左右；
(3) 干冰寄送。

6. 常规 m5C/m1A/m7G/ac4C RNA 修饰测序（RIP）

提取的RNA样品：
(1) 提取的总 RNA Qubit 检测总量不低于 100μg，浓度正常≥1ug/ul；
(2) 电泳检测具有明显的18S或28S主带，且条带清晰，或RIN值不低于7.5，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通过干冰寄送。

动物组织样品：
(1) 优先选用新鲜采集的样本，液氮或-80℃冻存的组织，冻存期间避免反复冻融；组织量推荐不小于100mg；
(2) 组织离体后，用PBS 或生理盐水快速漂洗，去除残留血液，血管或结缔组织后，马上进行液氮萃冻，后转入冻存管液氮或-80℃保存；或将组织切成小片后，在含有RNA later的冻存管中液氮或-80℃保存；

植物组织样品：
(1) 植物组织样本建议送样量≥600mg。尽量选取新鲜、幼嫩、生长 旺盛的组织部位；
(2) 准确取得所需组织后，用清水清洗干净表面的灰尘及泥土，立即放入事先标记好的冻存管中，或者用锡箔纸包裹好做好标记；
(3) 立即投入液氮中萃冻，后进行液氮或-80℃冰箱保存；

培养细胞样品：
(1) 贴壁细胞，细胞生长至对数期或达到细胞表型，去除细胞培养基，PBS漂洗细胞2-3次，最后一次将PBS去除干净，（一定要去除干净，残留小于10ul），按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器轻轻吹打，用Trizol将细胞裂解下来，转入1.5ml离心管后，-80℃保存；每个样本细胞数量建议10的7次方左右；
(2) 悬浮细胞，细胞生长至对数期或达到细胞表型后，收集细胞，用PBS洗涤1-2次，最后一次离心后，去除干净PBS，按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器快速将细胞重悬，转入1.5ml离心管后，-80℃保存；每个样本细胞数量建议10的7次方左右；
(3) 干冰寄送。

7. 常规 m5C RNA 甲基化测序（RNA-Bis）

提取的RNA样品：
(1) 提取的总 RNA Qubit 检测总量不低于 50μg，浓度正常≥500ng/ul；
(2) 电泳检测具有明显的18S或28S主带，且条带清晰，或RIN值不低于7.5，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通过干冰寄送。

动物组织样品：
(1) 优先选用新鲜采集的样本，液氮或-80℃冻存的组织，冻存期间避免反复冻融；组织量推荐不小于30mg；
(2) 组织离体后，用PBS 或生理盐水快速漂洗，去除残留血液，血管或结缔组织后，马上进行液氮萃冻，后转入冻存管液氮或-80℃保存；或将组织切成小片后，在含有RNA later的冻存管中液氮或-80℃保存；

植物组织样品：
(1) 植物组织样本建议送样量≥300mg。尽量选取新鲜、幼嫩、生长 旺盛的组织部位；
(2) 准确取得所需组织后，用清水清洗干净表面的灰尘及泥土，立即放入事先标记好的冻存管中，或者用锡箔纸包裹好做好标记；
(3) 立即投入液氮中萃冻，后进行液氮或-80℃冰箱保存；

培养细胞样品：
(1) 贴壁细胞，细胞生长至对数期或达到细胞表型，去除细胞培养基，PBS漂洗细胞2-3次，最后一次将PBS去除干净，（一定要去除干净，残留小于10ul），按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器轻轻吹打，用Trizol将细胞裂解下来，转入1.5ml离心管后，-80℃保存；每个样本细胞数量建议5X10的6次方左右；
(2) 悬浮细胞，细胞生长至对数期或达到细胞表型后，收集细胞，用PBS洗涤1-2次，最后一次离心后，去除干净PBS，按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器快速将细胞重悬，转入1.5ml离心管后，-80℃保存；每个样本细胞数量建议5X10的6次方左右；
(3) 干冰寄送。

8. 微量（m6A） RNA甲基化测序（MeRIP）

提取的RNA样品：
(1) 提取的总 RNA Qubit 检测总量不低于 10μg，浓度正常≥100ng/ul；
(2) 电泳检测具有明显的18S或28S主带，且条带清晰，或RIN值不低于7.5，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通过干冰寄送。

动物组织样品：
(1) 优先选用新鲜采集的样本，液氮或-80℃冻存的组织，冻存期间避免反复冻融；组织量推荐不小于30mg；
(2) 组织离体后，用PBS 或生理盐水快速漂洗，去除残留血液，血管或结缔组织后，马上进行液氮萃冻，后转入冻存管液氮或-80℃保存；或将组织切成小片后，在含有RNA later的冻存管中液氮或-80℃保存；

植物组织样品：
(1) 植物组织样本建议送样量≥100mg。尽量选取新鲜、幼嫩、生长 旺盛的组织部位；
(2) 准确取得所需组织后，用清水清洗干净表面的灰尘及泥土，立即放入事先标记好的冻存管中，或者用锡箔纸包裹好做好标记；
(3) 立即投入液氮中萃冻，后进行液氮或-80℃冰箱保存；

培养细胞样品：
(1) 贴壁细胞，细胞生长至对数期或达到细胞表型，去除细胞培养基，PBS漂洗细胞2-3次，最后一次将PBS去除干净，（一定要去除干净，残留小于10ul），按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器轻轻吹打，用Trizol将细胞裂解下来，转入1.5ml离心管后，-80℃保存；每个样本细胞数量建议10的6次方左右；
(2) 悬浮细胞，细胞生长至对数期或达到细胞表型后，收集细胞，用PBS洗涤1-2次，最后一次离心后，去除干净PBS，按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器快速将细胞重悬，转入1.5ml离心管后，-80℃保存；每个样本细胞数量建议10的6次方左右；
(3) 干冰寄送。

9. 微量（m7G/ac4C/m1A）RNA 甲基化测序（RIP）

提取的RNA样品：
(1) 提取的总 RNA Qubit 检测总量不低于 30μg，浓度正常≥300ng/ul；
(2) 电泳检测具有明显的18S或28S主带，且条带清晰，或RIN值不低于7.5，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通过干冰寄送。

动物组织样品：
(1) 优先选用新鲜采集的样本，液氮或-80℃冻存的组织，冻存期间避免反复冻融；组织量推荐不小于40mg；
(2) 组织离体后，用PBS 或生理盐水快速漂洗，去除残留血液，血管或结缔组织后，马上进行液氮萃冻，后转入冻存管液氮或-80℃保存；或将组织切成小片后，在含有RNA later的冻存管中液氮或-80℃保存；

植物组织样品：
(1) 植物组织样本建议送样量≥400mg。尽量选取新鲜、幼嫩、生长 旺盛的组织部位；
(2) 准确取得所需组织后，用清水清洗干净表面的灰尘及泥土，立即放入事先标记好的冻存管中，或者用锡箔纸包裹好做好标记；
(3) 立即投入液氮中萃冻，后进行液氮或-80℃冰箱保存；

培养细胞样品：
(1) 贴壁细胞，细胞生长至对数期或达到细胞表型，去除细胞培养基，PBS漂洗细胞2-3次，最后一次将PBS去除干净，（一定要去除干净，残留小于10ul），按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器轻轻吹打，用Trizol将细胞裂解下来，转入1.5ml离心管后，-80℃保存；每个样本细胞数量建议10的6次方左右；
(2) 悬浮细胞，细胞生长至对数期或达到细胞表型后，收集细胞，用PBS洗涤1-2次，最后一次离心后，去除干净PBS，按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器快速将细胞重悬，转入1.5ml离心管后，-80℃保存；每个样本细胞数量建议10的6次方左右；
(3) 干冰寄送。

10. 单细胞/微量细胞转录组测序（scRNA-seq）

(1) 细胞经PBS漂洗后进行分离，分离步骤如下：
(2) 细胞分离前，在0.2ml的无菌PCR管中加入2ul的RNA裂解液（实验开始前，联系公司寄送）；
(3) 将细胞经流式细胞仪或显微操作转移至含裂解液的PCR管中；分离细胞体积不超过0.5ul，以0.2-0.5ul为宜；-80℃冻存；
(4) 记录每管细胞量，每管样品推荐相同细胞量；
(5) 微量细胞推荐在40-100个细胞之间；
(6) 细胞分离液不能含有培养基，体液等，其对后续有抑制作用。

C.染色质类文库送样要求
1. ATAC-seq（细胞）

(1) 取生长状态良好的细胞进行胰蛋白酶消化计数，保证细胞存活率在90%以上；
(2) 将细胞重悬在冻存液中，每个冻存管加入8-10万个细胞，标记每管细胞数量，每个样品平行准备2-3管；
(3) 加入0.5-1ml冻存液，梯度降温至-80℃保存。
(4) 运输保证足够干冰，将细胞放入中间
(5) 冻存液基本配方： 20% 胎牛血清（FBS）+70% 完全培养基+10% 二甲亚砜（DMSO） 。

2. 染色体免疫共沉淀测序（CHIP-seq）

需要抗体富集：
贴壁细胞：
(1) 用PBS缓冲液（pH7.4）新鲜配制浓度为1%的甲醛溶液，37℃水浴锅预热待用；
(2) 弃除细胞培养液，用PBS洗涤后（去除干净），加入预热的1%新鲜配制的甲醛溶液，对于转录因子或DNA结合蛋白，37℃细胞培养箱孵育10-15min固定；对于组蛋白修饰研究，37℃细胞培养箱孵育5-8min。转录因子等研究要求直接在培养皿固定，组蛋白修饰优先推荐在培养皿直接固定，可接受胰蛋白酶消化细胞悬液后固定，（10cm细胞培养板需要10ml，15cm细胞培养板需要15ml）；
(3) 弃除甲醛溶液，分别用预冷的1×PBS+BSA（5mg/ml）缓冲液及预冷的1×PBS缓冲液清洗细胞各一次（10cm细胞培养板需要10ml，15cm细胞培养板需要15ml）；
(4) 在细胞培养板上均匀滴上500ul冰预冷的PBS完全液（PBS+1×PIC蛋白酶抑制剂）；
(5) 用刮板将细胞从培养板上刮下来，收集至EP管中；
(6) 2000rpm离心1分钟；
(7) 移除上清，轻弹管壁使收集的细胞重悬于残余的PBS中；
(8) -80℃冻存，干冰寄送，每个样本细胞量不低于107。

悬浮细胞样本处理：
(1) 用PBS缓冲液（pH7.4）新鲜配制浓度为1%的甲醛溶液，37℃预热待用，每个样品约10ml；
(2) 将不少于2X107细胞收集到离心管，500g离心5min弃除细胞培养液；用PBS洗涤，离心后（去除干净），加入5-10ml预热的1%新鲜配制的甲醛溶液轻轻重悬细胞，对于转录因子或DNA结合蛋白，37℃细胞培养箱孵育10-15min固定；对于组蛋白修饰研究，37℃细胞培养箱孵育5-10min；
(3) 弃除甲醛溶液后（可用终浓度125mM的甘氨酸中和），分别用约10ml预冷的1×PBS+BSA（5mg/ml）缓冲液及预冷的1×PBS缓冲液清洗细胞各一次；
(4) 在细胞沉淀中加入约500ul冰预冷的PBS完全液（PBS+1×PIC，蛋白酶抑制剂），转入1.5ml的离心管，2000rpm离心1分钟；
(5) 移除上清，轻弹管壁使收集的细胞重悬于残余的PBS中；
(6) -80℃冻存，干冰寄送，每个样本细胞量不低于107。

动物组织样品处理要求
(1) 尽快取下组织，去除其他附着组织如脂肪组织等；
(2) 剪开主血管，用冰冷的PBS 缓冲液（pH7.4）洗去血液；
(3) 尽量去除组织表面液体后放置到冻存管，液氮速冻后-80℃保存；
(4) 【注意事项】整个处理过程中要注意外源物种组织或者细胞污染，处理时间不要太长，最好不要超过1 小时，且在冰上操作。
(5) 样品需求量：每次ChIP 反应起始量为：人或者小鼠的组织：0.2 g 以上；（以上起始量根据小鼠组织实验结果，其他物种根据基因组大小起始量按比例调整）
(6) 样品必须使用干冰运输，时间尽量不要超过 72 小时，同时请用 Parafilm 膜将管口密封好，以防出现污染。
(7) 【注意事项】在运输过程中一定不能出现冻融现象出现，如果发现冻融现象建议重新寄样品。
(8) 请客户仔细处理样品，尽量避免污染和运输途中出现冻融，如果样品珍贵请客户自行将所送样品进行保留备份。

富集后仅建库：
(1) IP后Qubit检测富集DNA≥5ng，浓度正常不低于0.5ng/ul；
(2) DNA溶解于EB缓冲液（10mM Tris-HCl，pH 
(3) 7.5-8.5）； 
(4) 提供IP前染色质打断后的电泳图片，DNA片段分布在100-500bp为宜。