RNA类文库取样要求
RNA类文库取样要求 （版本：2025年01月）
A、RNA类文库取样要求
1. 常规m6A RNA甲基化测序（MeRIP）
提取的RNA样品：
(1) 提取的总RNA Qubit检测总量不低于75μg，浓度正常≥750ng/ul；
(2) 电泳检测具有明显的18S或28S主带，且条带清晰，或RIN值不低于7.5，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通过干冰寄送。
动物组织样品：
(1) 优先选用新鲜采集的样本，液氮或-80℃冻存的组织，冻存期间避免反复冻融；组织量推荐不小于50mg；
(2) 组织离体后，用PBS或生理盐水快速漂洗，去除残留血液，血管或结缔组织后，马上进行液氮萃冻，后转入冻存管液氮或-80℃保存；或将组织切成小片后，在含有RNA later的冻存管中液氮或-80℃保存；
植物组织样品：
(1) 植物组织样本建议送样量≥500mg。尽量选取新鲜、幼嫩、生长 旺盛的组织部位；
(2) 准确取得所需组织后，用清水清洗干净表面的灰尘及泥土，立即放入事先标记好的冻存管中，或者用锡箔纸包裹好做好标记；
(3) 立即投入液氮中萃冻，后进行液氮或-80℃冰箱保存；
培养细胞样品：
(1) 贴壁细胞，细胞生长至对数期或达到细胞表型，去除细胞培养基，PBS漂洗细胞2-3次，最后一次将PBS去除干净，（一定要去除干净，残留小于10ul），按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器轻轻吹打，用Trizol将细胞裂解下来，转入1.5ml离心管后，-80℃保存；每个样本细胞数量建议10的7次方左右；
(2) 悬浮细胞，细胞生长至对数期或达到细胞表型后，收集细胞，用PBS洗涤1-2次，最后一次离心后，去除干净PBS，按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器快速将细胞重悬，转入1.5ml离心管后，-80℃保存；每个样本细胞数量建议10的7次方左右；
(3) 干冰寄送。
2. 常规 m5C/m1A/m7G/ac4C RNA 修饰测序（RIP）
提取的RNA样品：
(1) 提取的总 RNA Qubit 检测总量不低于 100μg，浓度正常≥1ug/ul；
(2) 电泳检测具有明显的18S或28S主带，且条带清晰，或RIN值不低于7.5，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通过干冰寄送。
动物组织样品：
(1) 优先选用新鲜采集的样本，液氮或-80℃冻存的组织，冻存期间避免反复冻融；组织量推荐不小于100mg；
(2) 组织离体后，用PBS 或生理盐水快速漂洗，去除残留血液，血管或结缔组织后，马上进行液氮萃冻，后转入冻存管液氮或-80℃保存；或将组织切成小片后，在含有RNA later的冻存管中液氮或-80℃保存；
植物组织样品：
(1) 植物组织样本建议送样量≥600mg。尽量选取新鲜、幼嫩、生长 旺盛的组织部位；
(2) 准确取得所需组织后，用清水清洗干净表面的灰尘及泥土，立即放入事先标记好的冻存管中，或者用锡箔纸包裹好做好标记；
(3) 立即投入液氮中萃冻，后进行液氮或-80℃冰箱保存；
培养细胞样品：
(1) 贴壁细胞，细胞生长至对数期或达到细胞表型，去除细胞培养基，PBS漂洗细胞2-3次，最后一次将PBS去除干净，（一定要去除干净，残留小于10ul），按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器轻轻吹打，用Trizol将细胞裂解下来，转入1.5ml离心管后，-80℃保存；每个样本细胞数量建议10的7次方左右；
(2) 悬浮细胞，细胞生长至对数期或达到细胞表型后，收集细胞，用PBS洗涤1-2次，最后一次离心后，去除干净PBS，按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器快速将细胞重悬，转入1.5ml离心管后，-80℃保存；每个样本细胞数量建议10的7次方左右；
(3) 干冰寄送。
3. 常规 m5C RNA 甲基化测序（RNA-Bis）
提取的RNA样品：
(1) 提取的总 RNA Qubit 检测总量不低于 50μg，浓度正常≥500ng/ul；
(2) 电泳检测具有明显的18S或28S主带，且条带清晰，或RIN值不低于7.5，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通过干冰寄送。
动物组织样品：
(1) 优先选用新鲜采集的样本，液氮或-80℃冻存的组织，冻存期间避免反复冻融；组织量推荐不小于30mg；
(2) 组织离体后，用PBS 或生理盐水快速漂洗，去除残留血液，血管或结缔组织后，马上进行液氮萃冻，后转入冻存管液氮或-80℃保存；或将组织切成小片后，在含有RNA later的冻存管中液氮或-80℃保存；
植物组织样品：
(1) 植物组织样本建议送样量≥300mg。尽量选取新鲜、幼嫩、生长 旺盛的组织部位；
(2) 准确取得所需组织后，用清水清洗干净表面的灰尘及泥土，立即放入事先标记好的冻存管中，或者用锡箔纸包裹好做好标记；
(3) 立即投入液氮中萃冻，后进行液氮或-80℃冰箱保存；
培养细胞样品：
(1) 贴壁细胞，细胞生长至对数期或达到细胞表型，去除细胞培养基，PBS漂洗细胞2-3次，最后一次将PBS去除干净，（一定要去除干净，残留小于10ul），按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器轻轻吹打，用Trizol将细胞裂解下来，转入1.5ml离心管后，-80℃保存；每个样本细胞数量建议5X10的6次方左右；
(2) 悬浮细胞，细胞生长至对数期或达到细胞表型后，收集细胞，用PBS洗涤1-2次，最后一次离心后，去除干净PBS，按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器快速将细胞重悬，转入1.5ml离心管后，-80℃保存；每个样本细胞数量建议5X10的6次方左右；
(3) 干冰寄送。
4. 微量（m6A） RNA甲基化测序（MeRIP）
提取的RNA样品：
(1) 提取的总 RNA Qubit 检测总量不低于 10μg，浓度正常≥100ng/ul；
(2) 电泳检测具有明显的18S或28S主带，且条带清晰，或RIN值不低于7.5，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通过干冰寄送。
动物组织样品：
(1) 优先选用新鲜采集的样本，液氮或-80℃冻存的组织，冻存期间避免反复冻融；组织量推荐不小于30mg；
(2) 组织离体后，用PBS 或生理盐水快速漂洗，去除残留血液，血管或结缔组织后，马上进行液氮萃冻，后转入冻存管液氮或-80℃保存；或将组织切成小片后，在含有RNA later的冻存管中液氮或-80℃保存；
植物组织样品：
(1) 植物组织样本建议送样量≥100mg。尽量选取新鲜、幼嫩、生长 旺盛的组织部位；
(2) 准确取得所需组织后，用清水清洗干净表面的灰尘及泥土，立即放入事先标记好的冻存管中，或者用锡箔纸包裹好做好标记；
(3) 立即投入液氮中萃冻，后进行液氮或-80℃冰箱保存；
培养细胞样品：
(1) 贴壁细胞，细胞生长至对数期或达到细胞表型，去除细胞培养基，PBS漂洗细胞2-3次，最后一次将PBS去除干净，（一定要去除干净，残留小于10ul），按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器轻轻吹打，用Trizol将细胞裂解下来，转入1.5ml离心管后，-80℃保存；每个样本细胞数量建议10的6次方左右；
(2) 悬浮细胞，细胞生长至对数期或达到细胞表型后，收集细胞，用PBS洗涤1-2次，最后一次离心后，去除干净PBS，按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器快速将细胞重悬，转入1.5ml离心管后，-80℃保存；每个样本细胞数量建议10的6次方左右；
(3) 干冰寄送。
5. 微量（m7G/ac4C/m1A）RNA 甲基化测序（RIP）
提取的RNA样品：
(1) 提取的总 RNA Qubit 检测总量不低于 30μg，浓度正常≥300ng/ul；
(2) 电泳检测具有明显的18S或28S主带，且条带清晰，或RIN值不低于7.5，28s/18s≥1.5；
(3) 已提取RNA通过干冰寄送。
动物组织样品：
(1) 优先选用新鲜采集的样本，液氮或-80℃冻存的组织，冻存期间避免反复冻融；组织量推荐不小于40mg；
(2) 组织离体后，用PBS 或生理盐水快速漂洗，去除残留血液，血管或结缔组织后，马上进行液氮萃冻，后转入冻存管液氮或-80℃保存；或将组织切成小片后，在含有RNA later的冻存管中液氮或-80℃保存；
植物组织样品：
(1) 植物组织样本建议送样量≥400mg。尽量选取新鲜、幼嫩、生长 旺盛的组织部位；
(2) 准确取得所需组织后，用清水清洗干净表面的灰尘及泥土，立即放入事先标记好的冻存管中，或者用锡箔纸包裹好做好标记；
(3) 立即投入液氮中萃冻，后进行液氮或-80℃冰箱保存；
培养细胞样品：
(1) 贴壁细胞，细胞生长至对数期或达到细胞表型，去除细胞培养基，PBS漂洗细胞2-3次，最后一次将PBS去除干净，（一定要去除干净，残留小于10ul），按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器轻轻吹打，用Trizol将细胞裂解下来，转入1.5ml离心管后，-80℃保存；每个样本细胞数量建议10的6次方左右；
(2) 悬浮细胞，细胞生长至对数期或达到细胞表型后，收集细胞，用PBS洗涤1-2次，最后一次离心后，去除干净PBS，按照每1-5X10的6次方，加入1-1.5ml的Trizol，用移液器快速将细胞重悬，转入1.5ml离心管后，-80℃保存；每个样本细胞数量建议10的6次方左右；
(3) 干冰寄送。
