微量或单细胞样本取样要求
微量或单细胞样本取样要求（版本：2023年8月）
A、微量或单细胞样本取样要求
1、微量细胞或单细胞全基因组甲基化测序（Micro-WGBS/scWGBS）
若每个样本细胞数量大于10000，收集细胞后，可通过离心(1000g，4℃离心5min)，去除培养基或PBS液体，将细胞沉淀干冰寄送。也可以将细胞保存在细胞冻存液，梯度降温后，干冰寄送。
以下情况需提前联系，公司寄送WGBS甲基化细胞裂解液：
若每个样本细胞数量在1000-10000，分选细胞到1.5ml离心管后，要求体积不超过20ul（体积过大可通过1000g，4℃，5-10min离心，小心去除部分液体）。大约预估液体体积，加入等体积的细胞裂解液和0.5ul的蛋白酶K，记录每个样品加入裂解液的体积和大约细胞数目。离心管直立-80冻存，将细胞和裂解液一起固定在管子底部，固定过后干冰寄送；
若每个样本细胞数量在100-1000，分选细胞到1.5ml离心管后，要求体积不超过8ul（体积过大可通过1000g，4℃，5-10min离心，小心去除部分液体）。大约预估液体体积，加入等体积的细胞裂解液和0.5ul的蛋白酶K，记录每个样品加入裂解液的体积和大约细胞数目。离心管直立-80冻存，将细胞和裂解液一起固定在管子底部，固定过后干冰寄送。
若每个样本细胞数量在1-100，分选细胞到PCR管后，要求体积不超过5ul（体积过大可通过1000g，4℃，5-10min离心，小心去除部分液体）。大约预估液体体积，加入等体积的细胞裂解液和0.5ul的蛋白酶K，记录每个样品加入裂解液的体积和大约细胞数目。PCR管直立-80冻存，将细胞和裂解液一起固定在管子底部，固定过后干冰寄送；
2、微量细胞或单细胞简化基因组甲基化测序（XRBS/scXRBS）
若每个样本细胞数量大于10000，收集细胞后，可通过离心(1000g，4℃离心5min)，去除培养基或PBS液体，将细胞沉淀干冰寄送。也可以将细胞保存在细胞冻存液，梯度降温后，干冰寄送。
以下情况需提前联系，公司寄送XRBS甲基化细胞裂解液：
若每个样本细胞数量在1000-10000，分选细胞到1.5ml离心管后，要求体积不超过20ul（体积过大可通过1000g，4℃，5-10min离心，小心去除部分液体）。大约预估液体体积，加入等体积的细胞裂解液和0.5ul的蛋白酶，记录每个样品加入裂解液的体积和大约细胞数目。离心管直立-80冻存，将细胞和裂解液一起固定在管子底部，固定过后干冰寄送；
若每个样本细胞数量在100-1000，细胞洁净度要求较高，分选的细胞中不能含培养基，体液等抑制酶反应的液体等，分选后体积不超过4ul（体积过大可通过1000g，4℃，5-10min离心，小心去除部分液体），细胞分选到PCR管中，加入4ul的细胞裂解液和0.5ul的蛋白酶，记录每个样品大约细胞数目。离心管直立-80冻存，将细胞和裂解液一起固定在管子底部，固定过后干冰寄送；
若每个样本细胞数量在1-100，细胞洁净度要求较高，分选的细胞中不能含培养基，体液等抑制酶反应的液体等，分选后体积不超过1ul（体积过大可通过1000g，4℃，5-10min离心，小心去除部分液体），细胞分选到PCR管中，加入3ul的细胞裂解液和0.5ul的蛋白酶，记录每个样品大约细胞数目。离心管直立-80冻存，将细胞和裂解液一起固定在管子底部，固定过后干冰寄送；
3、微量细胞或单细胞转录组测序（Smart-seq2）
注意事项：
1） RNA容易降解且成熟mRNA主要分布在细胞质中，在细胞分离前，确保环境的洁净，以及分离过程中保证细胞的完整性，以免细胞破裂等。
2） 建议超净台内操作，实验前用 RNA-zap(Ambion)擦拭实验台面及相关器材，防止RNA 酶污染。
3） RNA 酶在外界环境，人体皮肤表面、汗液等广泛存在，试验操作请佩戴一次性手套及口罩， 并用酒精，RNA-zap擦拭手套和操作空间，实验过程中不要随意接触试验无关的易污染物品。
4） 细胞培养基、体液（如血液）等杂质残留会严重影响后续酶反应，细胞分离前请先用 PBS 洗涤，去除培养基等杂质后再进行后续操作。
5） 建议同一项目，不同样本，保持细胞的数量大致相同。
若每个样本细胞数量大于200，细胞收集到1.5ml离心管，记录每个样品管中的细胞数目，分离细胞如果液体超过20ul，可通过离心(1000g，4℃离心5-10min)，小心去除培养基或PBS液体，在细胞沉淀中加入500ul的Trizol裂解液，混匀-80保存，干冰寄送。
以下情况需提前联系，公司寄送RNA细胞裂解液：
若每个样本细胞数量在50-200，细胞收集到PCR管中，细胞分离残留液体体积不超过1ul，记录每个样品管中的细胞数目，在细胞中加入10ul的RNA细胞裂解液（如果确定细胞随带的液体体积小于1ul，可先在PCR管中先加入裂解液，然后将分选的细胞直接加入裂解液中），PCR管直立-80冻存，将细胞和裂解液一起固定在管子底部，固定过后干冰寄送。
若每个样本细胞数量在10-50，细胞收集到PCR管中，细胞分离残留液体体积不超过0.5ul，记录每个样品管中的细胞数目，在细胞中加入8ul的RNA细胞裂解液（如果确定细胞随带的液体体积小于0.5ul，可先在PCR管中加入裂解液，然后将分选的细胞直接加入裂解液中），PCR管直立-80冻存，将细胞和裂解液一起固定在管子底部，固定过后干冰寄送。
若每个样本细胞数量在1-10，细胞收集到PCR管中，细胞分离残留液体体积不超过0.5ul，记录每个样品管中的细胞数目，在细胞中加入5ul的RNA细胞裂解液（如果确定细胞随带的液体体积小于0.5ul，可先在PCR管中加入裂解液，然后将分选的细胞直接加入裂解液中），PCR管直立-80冻存，将细胞和裂解液一起固定在管子底部，固定过后干冰寄送。
4、微量细胞或单细胞全基因组甲基化+转录组测序（scWGBS+Smart-seq2）
注意事项：
1） RNA容易降解且成熟mRNA主要分布在细胞质中，在细胞分离前，确保环境的洁净，以及分离过程中保证细胞的完整性，以免细胞破裂等。
2） 建议超净台内操作，实验前用 RNA-zap(Ambion)擦拭实验台面及相关器材，防止RNA 酶污染。
3） RNA 酶在外界环境，人体皮肤表面、汗液等广泛存在，试验操作请佩戴一次性手套及口罩， 并用酒精，RNA-zap擦拭手套和操作空间，实验过程中不要随意接触试验无关的易污染物品。
4） 细胞培养基、体液（如血液）等杂质残留会严重影响后续酶反应，细胞分离前请先用 PBS 洗涤，去除培养基等杂质后再进行后续操作。
5） 同一项目，不同样本，保持细胞的数量大致相同。
以下情况需提前联系，公司寄送RNA细胞裂解液：
若每个样本细胞数量大于1000，细胞收集到PCR管中，细胞分离残留液体体积不超过2ul，记录每个样品管中的细胞数目，在细胞中加入12ul的RNA细胞裂解液（如果确定细胞随带的液体体积小于2ul，可先在PCR管中加入裂解液，然后将分选的细胞直接加入裂解液中），PCR管直立-80冻存，将细胞和裂解液一起固定在管子底部，固定过后干冰寄送。
若每个样本细胞数量在500-1000，细胞收集到PCR管中，细胞分离残留液体体积不超过1ul（若样品为10个细胞以内，尽可能不超过1ul），记录每个样品管中的细胞数目，在细胞中加入10ul的RNA细胞裂解液（如果确定细胞随带的液体体积小于1ul，可先在PCR管中加入裂解液，然后将分选的细胞直接加入裂解液中），PCR管直立-80冻存，将细胞和裂解液一起固定在管子底部，固定过后干冰寄送。
若每个样本细胞数量在1-500，细胞收集到PCR管中，细胞分离残留液体体积尽可能不超过0.5ul（若样品为10个细胞以内，尽可能不超过0.2ul），记录每个样品管中的细胞数目，在细胞中加入8ul的RNA细胞裂解液（如果确定细胞随带的液体体积小于0.5ul，可先在PCR管中加入裂解液，然后将分选的细胞直接加入裂解液中），PCR管直立-80冻存，将细胞和裂解液一起固定在管子底部，固定过后干冰寄送。
注意事项
1. 胚胎早期发育样本建议去除透明带。
2. 实验过程中使用到的吸头、PCR 管等耗材必须为 Nuclease-Free 级别且是低吸附材质。
